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एलिसा क्या है?

May 1, 2018

एलिसा क्या है?

बोनिन का स्मार्टरीडर-ए300 पूरी तरह से स्वचालित केमिलुमिनेसेंस फ्लुओरेसेंस एलिसा यूवी विज़ एब्सॉर्बेंस माइक्रोप्लेट रीडरिस जिसे नई पीढ़ी के उत्पाद के साथ डिज़ाइन किया गया है।के आवेदन एंजाइम से जुड़ी इम्मोनुसोर्बेन्त अस्से(एलिसा)एंजाइमों की उत्प्रेरक प्रतिक्रिया के साथ एंटीजन और एंटीबॉडी की विशिष्ट प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया को मिलाकर स्थापित एक इम्यूनोसे तकनीक है।

एलिसा का उपयोग एंटीजन या एंटीबॉडी को मापने के लिए किया जा सकता है।मुख्य प्रकार हैं: डबल-एंटीबॉडी सैंडविच विधि, अप्रत्यक्ष विधि, प्रतिस्पर्धी एंटीबॉडी का पता लगाना, कैप्चर विधि और एविडिन-बायोटिन विधि।

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डीडबल-प्रतिपिंडएसएंडविचएमनीति

डबल-एंटीबॉडी सैंडविच विधि का उपयोग अक्सर एंटीजन का पता लगाने के लिए किया जाता है, और सिद्धांत इस प्रकार है:

1. एंटीबॉडी ठोस चरण वाहक की सतह से एक ठोस चरण एंटीबॉडी बनाने के लिए बाध्य है;

2. एंटीबॉडी ठोस चरण वाहक की सतह से एक ठोस चरण एंटीबॉडी बनाने के लिए बाध्य है;

3. एंजाइम-लेबल एंटीबॉडी एक जटिल बनाने के लिए ठोस समर्थन पर स्थिर परीक्षण एंटीजन से बांधता है;

4. नमूने में परीक्षण किए जाने वाले एंटीजन के साथ एंजाइम की मात्रा सकारात्मक रूप से सहसंबद्ध होती है, सब्सट्रेट जोड़ा जाता है, और एंजाइम सब्सट्रेट को एक रंगीन उत्पाद उत्पन्न करने के लिए उत्प्रेरित करता है;

रंग प्रतिक्रिया की डिग्री के अनुसार एंटीजन का गुणात्मक या मात्रात्मक विश्लेषण किया जाता है।

 

मैंएनडीडायरेक्टएमनीति

एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए अक्सर अप्रत्यक्ष विधि का उपयोग किया जाता है, और सिद्धांत इस प्रकार है:

1. एक ठोस चरण प्रतिजन बनाने के लिए प्रतिजन ठोस चरण वाहक के लिए बाध्य है;

2. परीक्षण की जाने वाली एंटीबॉडी विशेष रूप से ठोस-चरण प्रतिजन से जुड़ी होती है और ठोस-चरण वाहक पर तय होती है;

3. एंजाइम-लेबल एंटीबॉडी एक जटिल बनाने के लिए ठोस समर्थन पर स्थिर परीक्षण के लिए एंटीबॉडी के साथ जोड़ती है;

4. सब्सट्रेट जोड़ा जाता है, रंग प्रतिक्रिया के लिए एंजाइम और सब्सट्रेट का उपयोग किया जाता है, और एंटीजन का गुणात्मक या मात्रात्मक विश्लेषण रंग प्रतिक्रिया की डिग्री के अनुसार किया जाता है।

 

सीप्रतियोगीप्रतिपिंडडीइटेक्शन

जब एंटीजन सामग्री में हस्तक्षेप करने वाले पदार्थों को निकालना मुश्किल होता है, या पर्याप्त शुद्ध एंटीजन प्राप्त करना मुश्किल होता है, तो प्रतिस्पर्धी विधि द्वारा विशिष्ट एंटीबॉडी का पता लगाया जा सकता है।

छोटे अणु एंटीजन या हैप्टेंस में दो से अधिक साइटों की कमी होती है जिनका उपयोग सैंडविच विधि के रूप में किया जा सकता है, इसलिए डबल एंटीबॉडी सैंडविच विधि का उपयोग नहीं किया जा सकता है, और प्रतिस्पर्धा विधि का भी उपयोग किया जा सकता है।

एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए प्रतिस्पर्धी विधि, सिद्धांत इस प्रकार है:

एक ठोस-चरण प्रतिजन बनाने के लिए एक माइक्रोप्लेट में एंटीजन को कोट करें, परीक्षण के लिए एंटीबॉडी और प्रतिस्पर्धी बंधन के लिए एंजाइम-लेबल एंटीबॉडी जोड़ें, एक उपयुक्त तापमान और एक निश्चित अवधि पर इनक्यूबेट करें, धोएं, और फिर एक सब्सट्रेट जोड़ें रंग प्रतिक्रिया।माध्यम में रंग की तीव्रता विश्लेषण की एकाग्रता के साथ नकारात्मक रूप से सहसंबद्ध है।

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बायोटिन-विदिन एलिसाएमनीति

बायोटिन-एविडिन विधि एंजाइम और सब्सट्रेट की रंग प्रतिक्रिया के माध्यम से एंटीजन या एंटीबॉडी का भी पता लगाती है।पिछली विधि से अंतर यह है कि एंजाइम को एंटीजन या एंटीबॉडी पर नहीं बल्कि बायोटिन पर लेबल किया जाता है.एविडिन के एक अणु में चार बायोटिन छोटे अणुओं के साथ एक विशिष्ट संबंध हो सकता है।चूंकि एविडिन कई बायोटिन से बंध सकता है, एक एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स को कई एंजाइमों के साथ लेबल किया जा सकता है, जो बहु-स्तरीय सिग्नल प्रवर्धन में भूमिका निभा सकता है।परीक्षण नमूने में एंटीजन-एंटीबॉडी सामग्री कम होने पर पता लगाने के लिए इस विधि का उपयोग किया जा सकता है।

उपकरणआरएलिसा के लिए आवश्यक प्रयोग

एलिसा प्रयोग में, एंटीबॉडी या एंटीजन पर लेबल किया गया एंजाइम रंगीन पदार्थों का उत्पादन करने के लिए सब्सट्रेट के साथ प्रतिक्रिया करता है।अलग-अलग रंग प्रतिक्रियाओं में अलग-अलग डिटेक्शन वेवलेंथ होते हैं।एलिसा प्रयोगों के लिए, डिटेक्शन वेवलेंथ 300-700 की सीमा के भीतर है।